Gerelateerde materialen
Alle materialen zijn verkrijgbaar via thermofisher.com, tenzij
anders aangegeven. 'MLS' geeft aan dat het materiaal
beschikbaar is via fisherscientific.com of een andere erkende
laboratoriumleverancier.
Item Bron
KaryoMAX™ Colcemid™ Solution, vloeibaar (10 µg/ml), in
HBSS
15210040
KaryoMAX™ Colcemid™ Solution, vloeibaar (10 µg/ml), in
PBS
15212012
KaryoMAX™ Giemsa Stain Stock Solution 10092013
Gurr Buer-tabletten (pH 6,8) 10582013
Amfotericine B 614122500
KaryoMAX™ Potassium Chloride Solution 105750
Trypsine 2,5%, geen fenolrood 150900
Nunc™ Cell-Culture Treated Multidishes, 6-wells 140675
Nunc™ 15ml Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tu
bes
339651
Nunc™ 50ml Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tu
bes
339653
Nunc™ Thermanox™ Coverslips (25 mm) 174985
Nunc™ Serological Pipettes (5 ml) 170355
Voorzorgsmaatregelen
Product niet gebruiken indien de verpakking, met inbegrip van
flessen en flacons, aangetast is en/of tekenen van microbiële
verontreiniging, troebelheid, verkleuring, uitdroging, barsten of
andere tekenen van achteruitgang vertoont. MarrowMAX™ Bone
Marrow Medium moet bevroren worden ontvangen; een ontdooid
product is derhalve een indicatie van een aangetast product.
VOORZICHTIG! Menselijk beenmerg is biologisch
gevaarlijk. Volg de standaard voorzorgsmaatregelen voor
behandeling, opslag en afvoer.
VOORZICHTIG! Niet gebruiken voor injectie of
infusie! Gelieve ernstige incidenten in verband met het
product te melden aan de fabrikant en de bevoegde
autoriteit van de EU-lidstaat waar de gebruiker en/of
patiënt is gevestigd.
Richtlijnen voor de procedure
• Gebruik altijd de juiste aseptische technieken en werk in
een laminaire flowkast. Raadpleeg onze Gibco Cell Culture
Basics voor aseptische behandeling.
• Voer, tenzij anders aangegeven, alle incubaties uit in een
bevochtigde incubator van 37°C, 5% CO2.
Richtlijnen voor MarrowMAX™ Bone Marrow Medium
• MarrowMAX™ Bone Marrow Medium wordt in bevroren
toestand geleverd en is in ontdooide toestand gebruiksklaar.
• Ontdooien bij 2-8 °C en vervolgens mengen door voorzichtig
te roeren om homogeniteit te verzekeren. Niet ontdooien bij
37 °C. Dit kan leiden tot de vorming van precipitaat en moet
worden vermeden.
• MarrowMAX™ Bone Marrow Medium bevat foetaal
runderserum (FBS); bij ontdooien en bewaren kunnen
vlokken ontstaan.
• In ontdooide en ongeopende toestand en beschermd tegen
licht kan MarrowMAX™ Bone Marrow Medium bij 2-8°C
maximaal twee maanden lang binnen de aangegeven uiterste
gebruiksdatum worden bewaard.
• Gebruik MarrowMAX™ Bone Marrow Medium-producten na
opening binnen 10 dagen voor maximale groeiprestaties.
• Vermijd herhaaldelijk opwarmen/afkoelen en langdurige
blootstelling aan licht.
• Niet gebruiken na de aangegeven uiterste gebruiksdatum.
Beenmergspecimens kweken voor
cytogenetische analyse
1. Gebruik de juiste hoeveelheid beenmerg, gebaseerd op
het aantal witte cellen van de patiënt, om met 6-wells
weefselkweken behandelde plaatjes (Nunc™ categorienr.
140675) te inoculeren met 5ml MarrowMAX™ Bone Marrow
Medium (1 x 106 cellen/ml).
2. Incubeer de kweken 24 uur lang in een bevochtigde
incubator bij 37°C en 5% CO2.
3. Voeg voor de laatste 1-2uur van de incubatie 0,05µg/ml
KaryoMAX™ Colcemid™ Solution (categorienr.15210040 of
categorienr. 15212012) toe aan elke well en roteer het plaatje
voorzichtig om te mengen.
4. Plaats het volume van elke well met beenmergkweek in
een kegelvormige slang van 15 ml (categorienr. 339651) en
centrifugeer 5 minuten lang bij 300×g.
5. Verwijder het supernatant, resuspendeer de pellet en
incubeer 15 minuten lang bij kamertemperatuur met 10ml
0,068 M KCl (KaryoMAX™ Potassium Chloride Solution
categorienr.105750) opgewarmd tot 37°C.
6. Voeg voorzichtig 0,5ml vers 3:1 methanol/glaciaal azijnzuur
fixeermiddel toe en centrifugeer 5 minuten lang bij 300×g.
7. Verwijder het supernatant en resuspendeer de pellet
10 minuten lang in fixeermiddel bij kamertemperatuur.
8. Herhaal stap7 driemaal en resuspendeer de pellet
vervolgens in 0,5 ml gekoeld fixeermiddel.
9. Pipetteer 35µl van de celsuspensie op een
nat microscoopglaasje en spreid het uit voor
chromosoomanalyse.
10. Kleur de glaasjes voor chromosoomanalyse volgens de
kleuringsmethoden van uw eigen laboratorium.
2Gebruiksaanwijzing voor MarrowMAX™ Bone Marrow Medium