Documenttranscriptie

NL (Nederlands) Datum van uitgifte: 2019-01 3 Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter Productinstructies Productbeschrijving en beoogd gebruik De 3M™ Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter wordt samen met het 3M™ Moleculair Detectiesysteem gebruikt voor een snelle en specifieke detectie van Campylobacter jejuni, Campylobacter lari en Campylobacter coli in verrijkte voedingsmiddelen en omgevingsmonsters uit de voedingsindustrie. De 3M Moleculaire Detectie Assay maakt gebruik van lusgebonden isothermische amplificatie voor de snelle amplificatie van nucleïnezuurschakels met een hoge specificiteit en gevoeligheid, in combinatie met bioluminescentie om de amplificatie op te sporen. Vermoedelijk positieve resultaten worden onmiddellijk gerapporteerd, terwijl negatieve resultaten pas na de voltooiing van de analyse worden weergegeven. Vermoedelijk positieve resultaten moeten worden bevestigd door middel van de door u verkozen methode of conform de lokale wet- en regelgeving(1,2). De 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter is bestemd voor gebruik in een laboratoriumomgeving door professionals die zijn geschoold in laboratoriumtechnieken. 3M heeft het gebruik van dit product niet gedocumenteerd in andere sectoren dan de voedings- of dranksector. 3M heeft dit product bijvoorbeeld niet gedocumenteerd voor farmaceutische, cosmetische, klinische of veterinaire monsters. De 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter is niet geëvalueerd voor alle mogelijke voedingsmiddelen, voedselverwerkingsprocessen, testprotocollen of voor alle mogelijke bacteriestammen. Zoals bij alle testmethoden, kunnen de bron, de formulering en de kwaliteit van het verrijkingsmedium de resultaten beïnvloeden. Factoren als bemonsteringsmethoden, testprotocollen, monstervoorbereiding, hantering en laboratoriumtechniek kunnen tevens de resultaten beïnvloeden. 3M beveelt evaluatie van de methode aan, met inbegrip van het verrijkingsmedium, in de omgeving van de gebruiker aan de hand van een voldoende aantal monsters met specifieke voedingsmiddelen en microbiële uitdagingen om ervoor te zorgen dat de methode aan de criteria van de gebruiker voldoet. 3M heeft de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter geëvalueerd met de 3M™ Campylobacter verrijkingsbouillon en bloedvrije Bolton verrijkingsbouillon. Het 3M™ Moleculair Detectieinstrument is bedoeld voor gebruik bij monsters die tijdens de lyseanalysestap een warmtebehandeling hebben ondergaan, die ontwikkeld is om de in het monster aanwezige organismen te vernietigen. Monsters die tijdens de lyseanalysestap niet de juiste warmtebehandeling hebben ondergaan, kunnen als een potentieel biologisch gevaar worden beschouwd en mogen NIET in het 3M Moleculaire Detectieinstrument worden geplaatst. 3M Food Safety is ISO 9001-gecertificeerd voor het ontwerp en de productie (ISO staat voor Internationale Organisatie voor Standaardisatie). De 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter-testset bevat 96 tests, die beschreven staan in Tabel 1. Tabel 1. Onderdelen 3M Moleculaire Detectie Assay-testset Artikel Identificatie Hoeveelheid Inhoud Opmerkingen Roze oplossing in doorzichtige buisjes 96 (12 stroken van 8 buisjes) 580 µl LS per buisje In rek en klaar voor gebruik 3M™ Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisjes Paarse buisjes 96 (3 zakjes met 4 stroken van 8 buisjes) Gevriesdroogde specifieke amplificatie- en detectiemix Klaar voor gebruik Extra doppen Paarse doppen 96 (12 stroken van 8 doppen) 3M™ Lyse-oplossing (LS) 3M™ Reagenscontrole (RC) Doorzichtige buisjes met kliksluiting 16 (2 zakjes met 8 individuele buisjes) 59 Klaar voor gebruik Gevriesdroogd controle-DNA, amplificatie- en detectiemix Klaar voor gebruik  NL (Nederlands) De negatieve controle (NC), die niet in de set is meegeleverd, is een steriel verrijkingsmedium, zoals 3M Campylobacter verrijkingsbouillon. Gebruik geen water als NC. U kunt een snelstartgids raadplegen via www.3M.com/foodsafety Veiligheid De gebruiker moet alle veiligheidsinformatie in de instructies van het 3M Moleculair Detectiesysteem en de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter lezen, begrijpen en in acht nemen. Bewaar de veiligheidsinstructies om deze later te kunnen raadplegen. WAARSCHUWING: Geeft een gevaarlijke situatie aan die, indien deze niet wordt vermeden, de dood, ernstig letsel en/of materiële schade tot gevolg zou kunnen hebben. OPMERKING: Geeft een mogelijk gevaarlijke situatie aan die, indien deze niet wordt vermeden, materiële schade tot gevolg zou kunnen hebben. W WAARSCHUWING Gebruik de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter niet voor de diagnose van aandoeningen bij mensen of dieren. De gebruiker moet zijn personeel scholen in de huidige en juiste testtechnieken, zoals Good Laboratory Practices(3), ISO/IEC 17025(4), of ISO 7218(5). Op de volgende wijze kunt u de risico’s beperken van een vals negatief resultaat dat tot vrijgave van een besmet product leidt: • Volg het protocol en voer de tests exact uit zoals aangegeven in de productinstructies. • Bewaar de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter zoals wordt aangegeven op de verpakking en in de productinstructies. • Gebruik de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter altijd vóór de vervaldatum. • Bereid 3M™ Campylobacter verrijkingsbouillon volgens de aanwijzingen in de productinstructies. • Autoclaveer 3M Campylobacter verrijkingsbouillon niet. • Gebruik de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter met voedsel- en omgevingsmonsters die intern of door een derde partij zijn gevalideerd. • Gebruik de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter alleen met oppervlakken, reinigingsmiddelen, protocollen en bacteriestammen die intern of door een derde partij zijn gevalideerd. • Voor een omgevingsmonster dat een neutraliserende bufferoplossing bevat met een arylsulfonaatcomplex, verdunt u 1:2 voorafgaand aan het testen (1 deel monster op 1 deel steriele verrijkingsbouillon). Ook kan 10 µl van de neutraliserende bufferverrijking naar de buisjes met 3M lyse-oplossing worden overgebracht. 3M™ monsterverwerkende producten, waaronder een neutraliserende buffer met arylsulfonaatcomplex: BPPFV10NB, RS96010NB, RS9604NB, SSL10NB, SSL10NB2G, HS10NB, HS10NB2G en HS2410NB2G. Op de volgende wijze kunt u de risico’s van blootstelling aan biologische en chemische gevaren beperken: • Voer de pathogeentests uit in een goed uitgerust laboratorium onder het toezicht van opgeleid personeel. Geïncubeerde verrijkingsmedia en -apparatuur of oppervlakken die met geïncubeerde verrijkingsmedia in contact zijn gekomen, bevatten mogelijk voldoende pathogenen om een gevaar voor de menselijke gezondheid te vormen. • Volg bij de hantering van reagentia en besmette monsters altijd de standaard veiligheidsvoorschriften voor laboratoria op, met inbegrip van het dragen van toepasselijke beschermende kleding en oogbescherming. • Vermijd contact met de inhoud van de verrijkingsmedia en reagensbuisjes na amplificatie. • Voer verrijkte monsters af conform de plaatselijke/regionale/nationale regelgevingsnormen. • Monsters die tijdens de lyseanalysestap niet de correcte warmtebehandeling hebben ondergaan, kunnen als een potentieel biologisch gevaar worden beschouwd en mogen NIET in het 3M Moleculaire Detectieinstrument worden geplaatst. Op de volgende wijze kunt u tijdens de voorbereiding van de test de risico’s van kruisbesmetting beperken: • Draag altijd handschoenen (om de gebruiker te beschermen en de introductie van nucleases te voorkomen). Op de volgende wijze kunt u de risico’s van blootstelling aan hete vloeistoffen beperken: • Overschrijd de aanbevolen temperatuurinstelling op de verwarmer niet. • Overschrijd de aanbevolen verwarmingstijd niet. • Gebruik een geschikte, gekalibreerde thermometer om de temperatuur van het 3M™ Moleculaire Detectie Verwarmingsblokinzetstuk te controleren (zoals een gedeeltelijk ondergedompelde thermometer of digitale thermokoppelthermometer, geen volledig ondergedompelde thermometer). De thermometer moet op de aangewezen locatie in het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk worden geplaatst. 60  NL (Nederlands) OPMERKING Op de volgende wijze kunt u tijdens de voorbereiding van de test de risico’s van kruisbesmetting beperken: • Verwissel uw handschoenen alvorens reagenspellets te hydrateren. • Het gebruik van steriele pipettips geschikt voor moleculaire biologie met spuitbusbarrière (gefilterd) wordt aanbevolen. • Gebruik een nieuwe pipettip bij elke monsteroverdracht. • Maak gebruik van Good Laboratory Practices bij de monsteroverdracht van de verrijking naar het lysebuisje. Ter voorkoming van pipetbesmetting kan de gebruiker ervoor kiezen een extra overdrachtsstap toe te voegen. De gebruiker kan bijvoorbeeld elk verrijkt monster naar een steriel buisje overbrengen. • Gebruik waar mogelijk een moleculair biologiewerkstation met een kiemdodende lamp. • Ontsmet regelmatig laboratoriumtafels en -apparatuur (pipetten, cap/decap gereedschap, enz.) met een bleekwateroplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) of DNA-verwijderingsoplossing. Op de volgende wijze kunt u het risico beperken op vals positieve resultaten: • U dient reagensbuisjes nooit na amplificatie te openen. • Verwijder de verontreinigde buisjes altijd door ze 1 uur lang onder te dompelen in een huishoudbleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water), uit de buurt van de testbereidingsruimte. • U dient reagensbuisjes nooit na amplificatie te autoclaveren. Raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor aanvullende informatie en lokale wet- en regelgeving inzake afvalverwerking. Als u vragen hebt over specifieke toepassingen of procedures, kunt u onze website www.3M.com/foodsafety bezoeken of contact opnemen met uw plaatselijke vertegenwoordiger of distributeur van 3M. Verantwoordelijkheid van de gebruiker Gebruikers worden geacht zich vertrouwd te maken met de productinstructies en -informatie. Bezoek onze website op www.3M.com/foodsafety of neem contact op met uw plaatselijke 3M-vertegenwoordiger of -distributeur voor meer informatie. Bij het kiezen van een testmethode is het belangrijk om te erkennen dat externe factoren, zoals bemonsteringsmethoden, testprotocollen, monstervoorbereiding, hantering, laboratoriumtechniek en het monster zelf invloed op de resultaten kunnen hebben. De gebruiker is verantwoordelijk voor de selectie van een testmethode of product waarbij een voldoende aantal monsters met gepaste matrices en microbiële uitdagingen wordt onderzocht, zodat de gekozen testmethode aan de criteria van de gebruiker voldoet. Het is ook de verantwoordelijkheid van de gebruiker om te bepalen of testmethoden en resultaten aan de vereisten van klanten en leveranciers voldoen. Zoals bij elke testmethode vormen de verkregen resultaten van het gebruik van een 3M Food Safety-product geen garantie voor de kwaliteit van de geteste matrices of processen. Om klanten te helpen bij het evalueren van de methode voor verschillende matrices heeft 3M de 3M™ Moleculaire Detectie Matrix-controleset ontwikkeld. Gebruik indien nodig de 3M Moleculaire Detectie - Matrix controle (MC) om te bepalen of de matrix het vermogen heeft om de resultaten van de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter te beïnvloeden. Test meerdere monsters die representatief zijn voor de matrix, zoals monsters met een verschillende oorsprong, tijdens een willekeurige validatieperiode bij het aannemen van de 3M-methode of bij het testen van nieuwe of onbekende matrices of matrices die grondstof- of procesveranderingen hebben ondergaan. Een matrix kan worden gedefinieerd als een soort product met intrinsieke eigenschappen, zoals samenstelling en proces. Verschillen tussen de matrices hangen af van hun verwerking of presentatie, bijvoorbeeld rauw ten opzichte van gepasteuriseerd; vers ten opzichte van gedroogd enzovoort. Beperkte garantie / beperkt verhaal BEHALVE WAAR UITDRUKKELIJK VERMELD IN EEN SECTIE MET BETREKKING TOT DE BEPERKTE GARANTIE VAN EEN AFZONDERLIJKE PRODUCTVERPAKKING, WIJST 3M ALLE UITDRUKKELIJKE EN IMPLICIETE GARANTIES AF, MET INBEGRIP VAN, MAAR NIET BEPERKT TOT, ELKE GARANTIE MET BETREKKING TOT DE VERHANDELBAARHEID EN DE GESCHIKTHEID VOOR EEN BEPAALD DOEL. Als een 3M Food Safety-product gebrekkig is, zal 3M of zijn gevolmachtigde distributeur naar eigen keuze het product vervangen of de aankoopprijs van het product terugbetalen. Dit is het enige rechtsmiddel waarover u beschikt. Indien u vermoedt dat een product gebrekkig is, moet u 3M daarvan binnen 60 dagen na de vaststelling op de hoogte brengen en het product naar 3M terugsturen. Bel onze klantenservice (1-800-328-1671 in de VS) of uw erkende vertegenwoordiger voor 3M Food Safety, die u autorisatie voor het retourneren van de goederen zal geven. 61  NL (Nederlands) Beperking van 3M aansprakelijkheid 3M IS NIET AANSPRAKELIJK VOOR ENIG(E) VERLIES OF SCHADE, ONGEACHT OF HET GAAT OM DIRECTE, INDIRECTE, SPECIALE, INCIDENTELE OF GEVOLGSCHADE, MET INBEGRIP VAN, MAAR NIET BEPERKT TOT WINSTDERVING. In geen geval zal de wettelijke aansprakelijkheid van 3M onder om het even welke juridische theorie de aankoopprijs van het vermeend gebrekkige product overschrijden. Opslag en afvalverwerking Sla de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter op tussen 2 en 8 °C (35 en 47 °F). Niet invriezen. Bewaar de set tijdens opslag uit het licht. Controleer na het openen van de set of het foliezakje niet beschadigd is. Gebruik het product niet als het zakje beschadigd is. Na opening moeten de ongebruikte reagensbuisjes altijd worden bewaard in de hersluitbare zak met droogmiddel om de stabiliteit van de gevriesdroogde reagentia te behouden. Sla opnieuw verzegelde zakjes op tussen 2 en 8 °C (35 en 47 °F) niet langer dan 90 dagen. Gebruik de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter niet na de vervaldatum. De vervaldatum en het batchnummer zijn terug te vinden op het etiket aan de buitenzijde van de doos. Na gebruik bevatten het verrijkingsmedium en de buisjes van de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter mogelijk pathogeen materiaal. Zodra de tests zijn afgerond, dient u de van kracht zijnde industrienormen betreffende de afvoer van besmet afval op te volgen. Raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor aanvullende informatie en lokale wet- en regelgeving inzake afvalverwerking. Gebruiksaanwijzingen Volg alle instructies zorgvuldig op. Wanneer dit niet gebeurt, kan dit onnauwkeurige resultaten tot gevolg hebben. Ontsmet regelmatig laboratoriumtafels en apparatuur (pipetten, cap/decap gereedschap, enz.) met een bleekwateroplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) of DNA-verwijderingsoplossing. De gebruiker dient de kwalificatietraining voor de bediener van het 3M Moleculair Detectiesysteem te voltooien, zoals beschreven in het document ‘Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular Detection System’(6). Bereiding van media Bereid 3M™ Campylobacter verrijkingsbouillon (CE250) volgens de aanwijzingen in de productinstructies. Autoclaveer het medium nooit voorafgaand aan het gebruik. Gebruik het bereide medium binnen 24 uur na bereiding. Sla de bereide bouillon op tussen 2 en 8 °C(7), beschermd tegen licht, indien de bouillon niet onmiddellijk na bereiding wordt gebruikt. Zorg ervoor dat de temperatuur van het medium zich voorafgaand aan het gebruik tussen 20 en 30 °C bevindt. Monsterverzameling Gebruik de 3M Campylobacter verrijkingsbouillon nooit voor vogelspoeling of als transportmedium. Verzamel en vervoer monsters volgens uw vastgestelde procedures voor het verzamelen van monsters. Monsterverrijking Tabel 2 biedt advies voor algemene verrijkingsprotocollen voor voedings- en omgevingsmonsters. Het is de verantwoordelijkheid van de gebruiker om alternatieve bemonsteringsprotocollen of verdunningsverhoudingen te valideren om ervoor te zorgen dat deze testmethode aan de criteria van de gebruiker voldoet. Monstervoorbereiding a. Spoeling van karkas en spoeling van rauwe gevogeltedelen 1. Spoel één minuut lang een van de ingewanden ontdaan karkas van gevogelte met 400 ml gebufferd peptoonwater (BPW). Bij het spoelen van rauwe gevogeltedelen spoelt u 1,8 tot 2 kg (4 lb ± 10%) vogeldelen met 400 ml BPW(1,8). 2. Laat voorafgaand aan het spoelen van het monster de overtollige vloeistoffen van karkassen en rauwe gevogeltedelen druppen om tegen te gaan dat procesvloeistoffen naar de monsterzak worden overgebracht(8). 3. Bij gevogelte dat is behandeld met cetylpyridiniumchloride (CPC), is het noodzakelijk om 5 ml per l polysorbaat 80 (IUPAC: polyoxyethyleen (20) sorbitanmonooleaat; CAS 9005-65-6) aan de bereide 3M Campylobacter verrijkingsbouillon toe te voegen. Polysorbaat 80 kan voorafgaand aan de sterilisatie aan water worden toegevoegd om het oplossen te vergemakkelijken of het kan voorafgaand aan de bereiding van 3M Campylobacter verrijkingsbouillon direct aan steriel water worden toegevoegd. 4. Breng op steriele wijze 30 ml spoeling over naar een steriele zak en voeg 30 ml 3M Campylobacter verrijkingsbouillon toe. b. Karkasspons 1. Sponzen dienen vochtig te zijn gemaakt met maximaal 25 ml BPW voordat het monster wordt genomen(1). Zorg er bij transport van de monsters voor dat de zak naar beneden is gerold en wordt bewaard tussen 2 en 8 °C. 2. Neem een uitstrijkje van het karkas van het gevogelte of neem een monster met behulp van een spons. 62  NL (Nederlands) 3. Plaats het staafje in een steriele zak en voeg 25 ml 3M Campylobacter verrijkingsbouillon toe. Zorg ervoor dat het staafje of de spons volledig met de verrijkingsmedia wordt bedekt. c. Producten met rauw gevogelte 1. Weeg op steriele wijze 325 ± 32,5 g van het monster af en plaats het in een steriele zak. Voeg 1625 ± 32,5 ml BPW toe aan het product met rauw gevogelte. Meng het product door de zak handmatig te masseren om klonten te verkleinen. 2. Voeg na het mengen 30 ml van het rauwe gevogelte mengsel toe aan een steriele zak en voeg vervolgens 30 ml 3M Campylobacter verrijkingsbouillon toe en meng grondig. d. Rauw en direct eetbaar vlees 1. Weeg op steriele wijze 25 g van het monster af en plaats het in een steriele zak. Een filterzak wordt aanbevolen om monsterneming te vergemakkelijken. 2. Voeg 225 ml 3M Campylobacter verrijkingsbouillon toe. 3. Masseer de zak handmatig om klonten te verkleinen, voorkom dat er tijdens het mengen luchtbellen ontstaan. Verwerk de zak niet met behulp van een Stomacher of blender. e. Overschoenen voor primaire productie 1. Verzamel monsters met overschoenen of sokken volgens uw vastgestelde procedures voor het verzamelen van monsters. 2. Plaats ÉÉN sok in een steriele zak en voeg 100 ml 3M Campylobacter verrijkingsbouillon toe. f. Sleep-staafje 1. Verzamel monsters met voorbevochtigd teststaafje volgens uw vastgestelde procedures voor het verzamelen van monsters. 2. Plaats het staafje in een steriele zak en breng 100 ml 3M Campylobacter verrijkingsbouillon over. Incubatie van verrijking 1. Rol de zak naar beneden om de bovenruimte te minimaliseren en tegen te gaan dat de verrijking aan lucht wordt blootgesteld. Masseer de zak voorzichtig gedurende ongeveer 10 ± 2 seconden. Verwerk de zak niet met behulp van een Stomacher of blender en voorkom dat er luchtbellen tijdens het mengen ontstaan. 2. Incubeer de zak aëroob op 41,5 ± 1 °C, raadpleeg tabel 2 voor de juiste incubatietijd. WAARSCHUWING: Mocht u gebruik maken van een neutraliserende buffer die arylsulfonaatcomplex bevat als hydraterende oplossing voor de spons,verdunt u het verrijkte omgevingsmonster 1:2 voorafgaand aan het testen (1 deel monster op 1 deel steriele verrijkingsbouillon) om de risico's te beperken van een vals negatief resultaat dat tot vrijgave van een besmet product leidt. Ook kan 10 µl van de neutraliserende bufferverrijking naar de buisjes met 3M lyseoplossing worden overgebracht. Het is de verantwoordelijkheid van de gebruiker om alternatieve bemonsteringsprotocollen of verdunningsverhoudingen te valideren om ervoor te zorgen dat deze testmethode aan de criteria van de gebruiker voldoet. Tabel 2. Algemene verrijkingsprotocollen. Monstermatrix Monstergrootte Spoelingen van karkas(a) Spoelingen van vogeldelen(a) 30 ml spoelwater in BPW 30 41,5 22-26 20 • Karkasspons(a) 1 spons voorbevochtigd met maximaal 25 ml BPW 25 41,5 22-26 20 • • Rauw vlees Direct eetbaar vlees 25 g 225 41,5 24-28 20 • Overschoenen voor primaire productie 1 overschoen 100 41,5 22-26 20 • Sleep-staafje uit primaire productie 1 voorbevochtigd hulpmiddel 100 41,5 22-26 20 • • 3M Verrijkings- Verrijkingstijd Campylobacter tempera(uur) verrijkingsbouillon tuur (± 1 °C) (ml)(b) 63 Volume monsteranalyse (µl)(c)  NL (Nederlands) (a) Als vogels met cetylpyridiniumchloride (CPC) behandeld zijn, is het noodzakelijk om 5 ml per l (polysorbaat 80; IUPAC: polyoxyethyleen (20) sorbitanmonooleaat; CAS 9005-65-6) toe te voegen aan de bereide 3M Campylobacter verrijkingsbouillon. Polysorbaat 80 kan voorafgaand aan de sterilisatie aan water worden toegevoegd of het kan voorafgaand aan de bereiding van 3M Campylobacter verrijkingsbouillon aan steriel water worden toegevoegd. (b) Gebruik 3M Campylobacter verrijkingsbouillon binnen 24 uur na bereiding. Zorg dat het medium voorafgaand aan gebruik op omgevingstemperatuur is (25-30 °C). (c) Masseer de onderkant van de zak voorzichtig voordat u een verrijkingsmonster voor analyse verzamelt. Nadat het monster is verzameld, rolt u de zak naar beneden om tegen te gaan dat de verrijking aan lucht wordt blootgesteld. Aanvullende monsters kunnen voor hertesten of bevestigingsstappen zijn vereist. Specifieke instructies voor gevalideerde methoden AOAC® Performance TestedSM (PTM)-certificaat nr. 111803 Uit de PTMSM-studies van het AOAC Research Institute blijkt dat de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter een effectieve methode is voor de detectie van Campylobacter. De in de studie geteste matrices die worden getoond in Tabel 3. Tabel 3. Verrijkingsprotocollen conform AOAC PTMSM-certificaat nr. 111803. Monstermatrix Monstergrootte 3M Campylobacter verrijkingsbouillon (ml)(c) Verrijkingstemperatuur (± 1 °C) Verrijkingstijd (uur) Volume monsteranalyse (µl)(d) Volledig karkas gespoeld in 400 ml BPW(a) (b) 30 ml spoelwater in BPW 30 41,5 22-26 20 Delen van gevogelte (1,8 tot 2 kg) gespoeld in 400 ml BPW(a) (b) 30 ml spoelwater in BPW 30 41,5 22-26 20 Karkasspons van kalkoen(a) (b) 1 spons voorbevochtigd met maximaal 25 ml BPW 25 41,5 24-26 20 Gemalen rauw gevogelte (325 ± 32,5 g) gespoeld in 1625 ± 32,5 ml BPW(b) 30 ml productmengsel in BPW 30 41,5 24-28 20 Kipnuggets 25 g 225 41,5 24-28 20 (a) Als vogels met cetylpyridiniumchloride (CPC) behandeld zijn, is het noodzakelijk om 5 ml per l (polysorbaat 80; IUPAC: polyoxyethyleen (20) sorbitanmonooleaat; CAS 9005-65-6) toe te voegen aan de bereide 3M Campylobacter verrijkingsbouillon. Polysorbaat 80 kan voorafgaand aan de sterilisatie aan water worden toegevoegd of het kan voorafgaand aan de bereiding van 3M Campylobacter verrijkingsbouillon aan steriel water worden toegevoegd. (b) Deze matrix kan ook worden verrijkt met 30 ml 2X bloedvrije Bolton verrijkingsbouillon (BF-BEB) gedurende 48 ± 2 uur op 42 ± 1,0 °C in microaërobe omstandigheden. Draag 20 µl van het monster over naar de 3M lyse-oplossing. (c) Gebruik 3M Campylobacter verrijkingsbouillon binnen 24 uur na bereiding. Zorg dat het medium voorafgaand aan gebruik op omgevingstemperatuur is (25-30 °C). (d) Masseer de onderkant van de zak voorzichtig voordat u een verrijkingsmonster voor analyse verzamelt. Nadat het monster is verzameld, rolt u de zak naar beneden om tegen te gaan dat de verrijking aan lucht wordt blootgesteld. Aanvullende monsters kunnen voor hertesten of bevestigingsstappen zijn vereist. Voorbereiding van de 3M™ Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray 1. Maak een doek of wegwerpdoekje vochtig met een bleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) en reinig de 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray. 2. Spoel de 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray met water. 3. Veeg de 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray met een wegwerpdoekje droog. 4. Zorg ervoor dat de 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray droog is voor gebruik. 64  NL (Nederlands) Voorbereiding van het 3M™ Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk Plaats het 3M Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk rechtstreeks op de laboratoriumtafel: de 3M Moleculaire Detectie - Lade voor koelblok wordt niet gebruikt. Gebruik het koelblok op de omgevingstemperatuur van het laboratorium (20-25 °C). Voorbereiding van het 3M™ Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk Plaats het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk in een droge dubbelblokverhitter. Schakel de droge blokverwarmer in en stel de temperatuur zo in dat het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk 100 ± 1 °C kan bereiken en aanhouden. OPMERKING: Afhankelijk van de verhitter laat u het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk ongeveer 30 minuten op temperatuur komen. Gebruik een geschikte, gekalibreerde, op de aangewezen locatie geplaatste thermometer (zoals een gedeeltelijk ondergedompelde thermometer of digitale thermokoppelthermometer, geen volledig ondergedompelde thermometer) om te controleren of het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk zich op 100 ± 1 °C bevindt. Voorbereiding van het 3M™ Moleculair Detectieinstrument 1. Start de 3M™ Moleculair Detectiesoftware en meld u aan. Neem contact op met uw vertegenwoordiger voor 3M Food Safety om ervoor te zorgen dat u de nieuwste versie van de software hebt. 2. Zet het 3M Moleculaire Detectieinstrument aan. 3. Maak of bewerk een run met de gegevens van elk monster. Raadpleeg de handleiding van het 3M Moleculair Detectiesysteem voor meer informatie. OPMERKING: Het 3M Moleculaire Detectieinstrument moet de status Klaar bereiken voordat u de 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray met reagensbuisjes invoert. Deze verwarmingsstap duurt ongeveer 20 minuten en wordt met een ORANJE lampje op de statusbalk van het instrument aangeduid. Wanneer het instrument klaar is voor een run, wordt de statusbalk GROEN. Lyse Verwijder de bodem van het rek met 3M lyse-oplossing met een schroevendraaier voordat u het in het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk plaatst. 1. Laat de buisjes met 3M lyse-oplossing opwarmen door het rek een nacht lang (16-18 uur) op omgevingstemperatuur (20-25 °C) te plaatsen. U kunt de buisjes met 3M lyse-oplossing eveneens op omgevingstemperatuur brengen door de buisjes ten minste 2 uur lang op de laboratoriumtafel te plaatsen, de buisjes 1 uur lang op een temperatuur van 37 ± 1 °C in een incubator te incuberen of ze 30 seconden lang op een temperatuur van 100 °C in een droge dubbelblokverwarmer te plaatsen. 2. Keer de buisjes met dop om om ze te mengen. Ga binnen 4 uur na het omkeren verder met de volgende stap. 3. Haal het verrijkte monster uit de incubator. 3.1.1 Masseer de onderkant van de verrijkingszak voorzichtig voordat u het monster naar het buisje met 3M lyse-oplossing overbrengt. 3.1.2 Aanvullende monsters kunnen voor hertesten of bevestigingsstappen zijn vereist. Nadat het monster is verzameld, rolt u de zak naar beneden om de bovenruimte te minimaliseren en tegen te gaan dat de verrijking aan lucht wordt blootgesteld. Als bevestiging van vermoedelijke resultaten is vereist, gaat u verder met de bevestigingsstappen zodra het vermoedelijke resultaat is verkregen. 4. Er is een buisje met 3M lyse-oplossing vereist voor elk monster, evenals het NC-monster (steriel verrijkingsmedium). 4.1 Stroken met buisjes met 3M lyse-oplossing kunnen worden afgesneden tot op het gewenste aantal buisjes. Selecteer het aantal vereiste buisjes of 8-buisstroken. Plaats de buisjes met 3M lyse-oplossing in een leeg rek. 4.2 Haal de stroken van de buisjes met 3M lyse-oplossing een voor een uit de verpakking en gebruik een nieuwe pipettip voor elke overdrachtsstap om zo kruisbesmetting te voorkomen. 4.3 Breng het verrijkte monster over naar de buisjes met 3M lyse-oplossing zoals hieronder beschreven: 65  NL (Nederlands) Breng eerst elk verrijkt monster over naar een individueel buisje met 3M lyse-oplossing. Breng de NC als laatste over. 4.4 Gebruik de lyse van het 3M™ Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Lyse om één voor één een strook van een buisje met 3M lyse-oplossing open te maken. 4.5 Gooi de dop van het buisje met 3M lyse-oplossing weg - als er lysaat voor een hertest wordt bewaard, dienen de doppen in een schone bak te worden geplaatst om deze na de lyse opnieuw aan te brengen. 4.5.1 Zie Appendix A voor de verwerking van bewaard lysaat. 4.6 Breng 20 µl van het monster over in een buisje met 3M lyse-oplossing. 5. Herhaal, indien nodig, stappen 4.4 tot 4.6 voor alle monsters die worden getest. 20 µl 6. Wanneer alle monsters overgebracht zijn, brengt u 20 µl NC (steriel verrijkingsmedium, bijv. BPW) over naar een buisje met 3M lyse-oplossing. Gebruik geen water als NC. 7. Controleer of de temperatuur van het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk zich op 100 ± 1 °C bevindt. 8. Plaats het onbedekte rek met buisjes met 3M lyse-oplossing in het 3M Moleculaire Detectie Verwarmingsblokinzetstuk en verwarm 15 ± 1 minuten. Tijdens de verwarming verandert de 3M lyse-oplossing van roze (koel) naar geel (heet). 8.1 Monsters die tijdens de lyseanalysestap niet de juiste warmtebehandeling hebben ondergaan, kunnen als een potentieel biologisch gevaar worden beschouwd en mogen NIET in het 3M Moleculaire Detectieinstrument worden geplaatst. 9. Haal het onbedekte rek met buisjes met 3M lyse-oplossing uit het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblok en laat het minimaal 5 minuten en maximaal 10 minuten afkoelen in het 3M Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk. Het 3M Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk, gebruikt op omgevingstemperatuur zonder de 3M™ Moleculaire Detectie - Lade voor Koelblok, moet rechtstreeks op de laboratoriumtafel leunen. Zodra de 3M lyse-oplossing koel is, krijgt deze een roze kleur. 10. Haal het rek met buisjes met 3M lyse-oplossing uit het 3M Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk. 00:15:00 99-101ºC 20-25ºC 00:05:00 Amplificatie 1. Er is één 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisje vereist voor ieder monster en de NC. 1.1 Buisstrookjes kunnen tot op het gewenste aantal buisjes worden afgesneden. Selecteer het aantal vereiste individuele 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisjes of 8-buisstroken. 1.2 Plaats de buisjes in een leeg rek. 1.3 Zorg ervoor dat het reagens op de bodem van de buisjes niet wordt verstoord. 2. Selecteer één buisje voor 3M Reagenscontrole en plaats dit in het rek. 3. Open de stroken van de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisjes een voor een en gebruik een nieuwe pipettip voor elke overdrachtsstap om zo kruisbesmetting te voorkomen. 4. Breng alle lysaten over naar een 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisje en een buisje voor 3M Reagenscontrole zoals hieronder beschreven: Breng als eerste elk lysaatmonster over naar een individueel 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisje, gevolgd door de NC. Hydrateer het buisje voor 3M Reagenscontrole als laatste. 66  NL (Nederlands) 5. Open de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisjes een voor een met het 3M™ Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Reagens. Gooi de dop weg. 5.1 Breng 20 µl van het lysaatmonster uit de bovenste laag van de vloeistof (voorkom bezinksel) in het buisje met 3M lyse-oplossing over naar het bijbehorende 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisje. Laat het mengsel in een hoek uitlopen om de pellets niet te verstoren. Meng het mengsel door voorzichtig 5 keer naar boven en naar onder te pipetteren. 5.2 Herhaal stap 5.1 totdat elk individueel lysaatmonster aan het bijbehorende 3M Moleculair Detectie Assay 2 Campylobacter reagensbuisje in de strook is toegevoegd. 5.3 Bedek de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisjes met de bijgeleverde extra dop en gebruik de afgeronde zijde van het 3M Moleculaire Detectie Cap/Decap gereedschap - Reagens om in een vooren achterwaartse beweging druk uit te oefenen om ervoor te zorgen dat de dop goed vastzit. 5.4 Herhaal stappen 5.1 tot 5.3, indien nodig, voor alle monsters die moeten worden getest. 5.5 Zodra alle lysaatmonsters zijn overgebracht, herhaalt u stappen 5.1 tot 5.3 om 20 µl NC-lysaat over te brengen naar een 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisje. 5.6 Breng 20 µl NC-lysaat over naar een buisje voor 3M Reagenscontrole. Laat het mengsel in een hoek uitlopen om de pellets niet te verstoren. Meng het mengsel door voorzichtig 5 keer naar boven en naar onder te pipetteren. 6. Plaats de buisjes met dop in een schone en ontsmette 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray. Sluit en vergrendel het deksel van de 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray. 20 µL 7. Controleer en bevestig de geconfigureerde run en start de 3M Moleculaire Detectiesoftware. 8. Klik op de startknop van de software en selecteer het te gebruiken instrument. Het deksel van het geselecteerde instrument wordt automatisch geopend. 9. Plaats de 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray in het 3M Moleculaire Detectieinstrument en sluit het deksel om de analyse te beginnen. De resultaten zijn binnen 60 minuten beschikbaar, maar positieve resultaten kunnen sneller worden gedetecteerd. 10. Nadat de test is afgerond, haalt u de 3M Moleculaire Detectie - Speed Loader Tray uit het 3M Moleculaire Detectieinstrument en verwijdert u de buisjes door ze eerst gedurende 1 uur, op een plaats die ver van de testbereidingsruimte verwijderd is, in een bleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water) te dompelen. OPMERKING: Om het risico op vals positieve resultaten door kruisbesmetting te beperken, mag u nooit reagensbuisjes met geamplificeerd DNA openen. Dit geldt voor 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter reagensbuisjes, buisjes voor 3M Reagenscontrole en 3M Matrix Controlebuisjes. Verwijder de verzegelde reagensbuisjes altijd door ze 1 uur lang onder te dompelen in een huishoudbleekmiddeloplossing van 1-5% (volumeconcentratie in water), uit de buurt van de testbereidingsruimte. Resultaten en interpretatie Een algoritme interpreteert de lichtuitvoercurve die het resultaat is van de nucleïnezuuramplificatie. De software analyseert de resultaten automatisch en deze worden op basis van het resultaat met een kleurencode aangegeven. Een positief of negatief resultaat wordt bepaald door de analyse van een aantal unieke curveparameters. Vermoedelijk positieve resultaten worden onmiddellijk gerapporteerd, terwijl de negatieve en inspectieresultaten pas na de afronding van de analyse worden weergegeven. Vermoedelijk positieve resultaten moeten worden bevestigd aan de hand van de standaard werkmethoden van het laboratorium of door de gepaste methode voor bevestiging te volgen(1,2), te beginnen met de overdracht van de primaire 3M Campylobacter verrijkingsbouillon-verrijking naar selectieve Campylobacter-platen met microaerofiele incubatie, bevestiging van de isolaten met gebruik van toepasselijke biochemische, microscopische en serologische methoden. Voor het beste onderhoud van de verrijking rolt u de verrijkingszak naar beneden nadat een monster is verzameld. OPMERKING: Zelfs een negatief monster heeft geen nulmeting tot gevolg, want het systeem en de 3M Moleculair Detectie Assay 2 - Campylobacter-amplificatiereagentia geven een relatieve lichteenheid (RLU) achtergrondlezing. 67  NL (Nederlands) In het onwaarschijnlijke geval van ongebruikelijke lichtuitvoer, definieert het algoritme dit als ‘Inspecteren’. 3M beveelt de gebruiker aan om de test voor de te inspecteren monsters opnieuw uit te voeren. Als het resultaat nog steeds ‘Inspecteren’ is, voert u een bevestigingstest uit aan de hand van uw voorkeursmethode of volgens lokale wet- en regelgeving(1,2). Appendix A. Protocolonderbreking: Warmtebehandelde lysaten opslaan en hertesten 1. U kunt een warmtebehandeld lysaat opslaan door opnieuw een schone dop op het buisje met 3M lyse-oplossing te plaatsen (zie hoofdstuk 4.5 Lyse). 2. Sla maximaal 72 uur op bij een temperatuur van 2 tot 8 °C. 3. Bereid een opgeslagen monster voor op de amplificatie door het 2-3 keer om te keren om het te mengen. 4. Verwijder de doppen van de buisjes. 5. Plaats de gemengde lysaatbuisjes op het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblokinzetstuk en verwarm gedurende 5 ± 1 minuten op een temperatuur van 100 ± 1 °C. 6. Haal het rek met buisjes met 3M lyse-oplossing uit het 3M Moleculaire Detectie - Verwarmingsblok en laat het minimaal 5 minuten en maximaal 10 minuten in het 3M Moleculaire Detectie - Koelblokinzetstuk afkoelen. 7. Ga verder met het protocol in het hierboven omschreven hoofdstuk Amplificatie. Referenties: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Microbiology Laboratory Guidebook. U. S. Department of Agriculture (USDA) Food Safety and Inspection Service (FSIS) Microbiology Laboratory guidebook 41.04. Isolation and identification of Campylobacter jejuni/coli/lari from poultry rinse, sponge and raw product samples. August 1, 2016. ISO 10272-1. Microbiology of the food chain - Horizontal method for detection and enumeration of Campylobacter spp. Part 1. Detectiemethode. U.S. Food and Drug Administration. Code of Federal Regulations, Hoofdstuk 21, Deel 58. Good Laboratory Practice for Nonclinical Laboratory Studies. ISO/IEC 17025. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories. ISO 7218. Microbiology of food and animal feeding stuffs - General rules for microbiological examination. 3M Installation Qualification (IQ) / Operational Qualification (OQ) Protocols and Instructions for 3M Molecular Detection System. Neem contact op met uw vertegenwoordiger voor 3M Food Safety om een exemplaar van dit document te ontvangen. ISO 11133. Microbiology of food, animal feed and water - Preparation, production, storage and performance testing of culture media. U. S. Department of Agriculture (USDA). Food Safety and Inspection Service (FSIS) Directive 10, 250.1. Salmonella and Campylobacter verification program for raw meat and poultry products. September 20, 2013. Verklaring van symbolen www.3M.com/foodsafety/symbols 68