Documenttranscriptie

NL (Nederlands) 3 Datum van uitgifte: 2017-11 Productinstructies Hazelnoot Proteïne ELISA test Enzymgekoppeld immunosorbent-assay (ELISA) voor de kwantitatieve analyse van hazelnootproteïne. Productbeschrijving en beoogd gebruik De 3M™ Hazelnoot Proteïne ELISA test is bedoeld voor de detectie van hazelnootproteïne in CIP-water ('clean-inplace') van de laatste spoeling, omgevingsmonsters, voedingsingrediënten en verwerkte voedingsmiddelen. De 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test maakt gebruik van een sandwich-ELISA. De aanwezige hazelnootproteïne in het monster reageert met het anti-hazelnoot antilichaam, dat geadsorbeerd is aan het oppervlak van wells in een polystyreen microtiterplaat. Nadat ongebonden proteïne is verwijderd door middel van wassen, worden anti-hazelnoot antilichamen geconjugeerd met mierikswortelperoxidase (HRP – 'horseradish peroxidase') toegevoegd. Deze met enzymen gelabelde antilichamen vormen complexen met de eerder gebonden hazelnootproteïne. Na een tweede wasstap wordt het enzym dat is gebonden aan het immunosorbent gedetecteerd door middel van het toevoegen van een chromogene substraat, 3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine (TMB). De kleurontwikkeling van deze enzymatische reactie staat in direct verband met de concentratie van hazelnootproteïne in het geteste monster; daarom is de absorptie, bij 450 nm, een meting voor de concentratie van hazelnootproteïne in het testmonster. De kwantiteit van hazelnootproteïne in het testmonster kan geëxtrapoleerd worden van de standaardcurve die is samengesteld met behulp van standaarden van bekende concentraties en is aangepast aan de verdunning van het monster. De 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test is bedoeld voor gebruik in een laboratoriumomgeving door professionals geschoold in laboratoriumtechnieken. 3M heeft het gebruik van dit product niet gedocumenteerd in andere sectoren dan de voedings- of dranksector. 3M heeft dit product bijvoorbeeld niet gedocumenteerd voor farmaceutische, cosmetische, klinische of veterinaire monsters. De 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test is niet getest met alle voorkomende voedingsproducten, voedingsprocessen en testprotocollen. De 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test bevat 96 wells, die zijn beschreven in Tabel 1. Tabel 1. Setonderdelen Artikel Identificatie Voorbereiding (raadpleeg het onderdeel 'De reagentia voorbereiden' voor details) Opslag Stabiliteit 3M™ Hazelnoot Proteïne ELISA wells Een foliezakje met een plaat van 96 verwijderbare wells gecoat met antilichaam. Klaar voor gebruik. 2-8 °C in verzegelde foliezak met droogmiddel. Hersluit de foliezak met de ongebruikte wells en droogmiddel. Bewaar de set bij 2-8 °C om de stabiliteit te behouden tot de vervaldatum. 3M™ Hazelnoot HRPconjugaat (10X) Een ampul met 1,5 ml met 10X antilichamen geconjugeerd met HRP (mierikswortelperoxidase) (10X). Verdun voorafgaand aan gebruik onmiddellijk 1/10 om een 1X werkzame oplossing te maken. 2-8 °C in het donker. Het 10X conjugaat is stabiel tot de vervaldatum van de set. Raadpleeg het onderdeel 'ELISAprocedure' voor de standaard voorbereiding. 2-8 °C. Niet invriezen. 3M Hazelnoot Proteïne Standaardconcentraat is stabiel tot de vervaldatum van de set. 3M™ Hazelnoot Proteïne Een ampul met Standaardconcentraat hazelnootproteïne waarvan de concentratie bekend is. 1  NL (Nederlands) 3M™ Verdunningsmiddel (5X) Eén flesje van 50 ml met 5X verdunningsmiddel. Verdun voorafgaand aan gebruik onmiddellijk 1/5 om een 1X werkzame oplossing te maken. 2-8 °C De 5X 3M Verdunningsoplossing is stabiel tot de vervaldatum van de set. 3M™ Wasoplossing (20X) Eén flesje van 50 ml met 20X wasoplossing. Verdun 1/20 om een 1X werkzame oplossing te maken. 2-8 °C voor zowel 1X werkzame oplossing als 20X wasoplossingsconcentraat. De 20X 3M Wasoplossing is stabiel tot de vervaldatum van de set. De 1X wasoplossing is na bereiding minimaal een week stabiel. 3M™ Extractiebuffer E26 (4X) Eén flesje van 120 ml met 4X extractiebuffer. Verdun 1/4 om een 1X werkzame oplossing te maken. De werkzame oplossing moet voorafgaand aan gebruik worden verhit tot 50-60 °C. 2-8 °C voor 1X werkzame oplossing en 4X 3M Extractiebufferconcentraat. De 1X extractiebuffer en 4X 3M Extractiebuffer zijn stabiel tot de vervaldatum van de set. 3M™ Chromogene substraatoplossing Eén flesje van 12 ml met 3,3’,5,5’tetramethylbenzidine (TMB). Klaar voor gebruik. 2-8 °C in het donker. Bescherm tegen licht. De 3M Chromogene substraatoplossing is stabiel tot de vervaldatum van de set. 3M™ Stopoplossing Eén flesje van 12 ml met 0,3 M zwavelzuur. Klaar voor gebruik. 2-8 °C De 3M Stopoplossing is stabiel tot de vervaldatum van de set. Materialen die niet in de set worden geleverd: • • • • • • • • • • precisiepipetten en pipettips om 10 tot 100 μl te verzamelen testbuisjes was-/aspiratiemachine voor de microtiterplaat gedestilleerd of gedeïoniseerd water aflezer voor de microtiterplaat diverse laboratoriumproducten voor de bereiding van reagentia en bufferoplossingen timer vortexmenger schudwaterbad of schudincubator orbitale schudmachine Veiligheid De gebruiker dient alle veiligheidsinformatie in de instructies voor de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test te lezen, te begrijpen en op te volgen. Bewaar de veiligheidsinstructies om deze later te kunnen raadplegen. WAARSCHUWING: geeft een gevaarlijke situatie aan die, indien deze niet wordt vermeden, de dood, ernstig letsel en/of materiële schade tot gevolg kan hebben. OPMERKING: geeft een mogelijk gevaarlijke situatie aan die, als ze niet vermeden wordt, kan resulteren in materiële schade. W WAARSCHUWING Om de risico's van blootstelling aan chemicaliën te verminderen: • Afvoeren volgens de huidige plaatselijke/regionale/nationale/industriële standaarden en regelgevingen. 2  NL (Nederlands) • • • De gebruiker moet zijn personeel scholen in de huidige juiste testtechnieken; bijvoorbeeld, Goede laboratoriumpraktijken1 of ISO/IEC 170252. Volg altijd de standaard veiligheidsvoorschriften voor laboratoria op, waaronder het dragen van toepasselijke beschermende kleding en oogbescherming bij het hanteren van reagentia. Vermijd contact van de huid met de 3M Stopoplossing, raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor aanvullende informatie. Om de risico's te beperken die verbonden zijn aan foutieve negatieve resultaten die kunnen leiden tot de vrijgave van besmet product: • Bewaar de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test zoals aangegeven wordt op de verpakking en in de productinstructies. • Gebruik de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test voor voedings- en omgevingsmonsters die intern of door een derde partij zijn gevalideerd. • Volg het protocol en voer de testen exact uit zoals aangegeven in de productinstructies. • 3M heeft het gebruik van de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test niet gedocumenteerd in andere sectoren dan de voedings- en drankensector. 3M heeft dit product bijvoorbeeld niet gedocumenteerd voor farmaceutische, cosmetische, klinische of veterinaire monsters. Om de risico’s van onjuiste resultaten die tot de vrijlating van besmet product leiden te verminderen, doet u het volgende: • Gebruik de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test altijd vóór de vervaldatum. • Bereid de werkzame oplossingen met behulp van de geconcentreerde reagentia van de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test altijd bij een temperatuur van 20-25 °C. • Vries het 3M Hazelnoot Proteïne Standaardconcentraat niet in. • Gebruik de chromogene substraatoplossing niet als deze blauw kleurt. Volg de Goede laboratoriumpraktijken1 om kruisbesmetting van de 3M Chromogene substraatoplossing te voorkomen. OPMERKING Beperk de risico's van onjuiste resultaten op de volgende wijze: • De stabiliteit van de monsters na extractie is niet geëvalueerd. De ELISA-procedure moet direct na extractie van het monster worden uitgevoerd. • Hanteer de 3M Hazelnoot Proteïne Standaarden volgens Goede laboratoriumpraktijken1 om kruisbesmetting van monsters te voorkomen. Raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor aanvullende informatie. Voor informatie over documentatie van productprestaties kunt u onze website op www.3M.com/foodsafety bezoeken of contact opnemen met uw plaatselijke 3M-vertegenwoordiger of -distributeur. Verantwoordelijkheid van de gebruiker Gebruikers worden geacht zich vertrouwd te maken met de productinstructies en -informatie. Bezoek onze website www.3M.com/foodsafety of neem contact op met uw plaatselijke 3M-vertegenwoordiger of -distributeur voor meer informatie. Zoals met alle testmethodes die worden gebruikt voor voedselanalyse, kan de testmatrix invloed hebben op de resultaten. Bij het kiezen van een testmethode is het belangrijk om te erkennen dat externe factoren zoals proefmethoden, testprotocollen, proefvoorbereiding en -behandeling en laboratoriumtechniek invloed kunnen hebben op de resultaten. Het voedselmonster kan de resultaten beïnvloeden. Het is de verantwoordelijkheid van de gebruiker dat hij/zij voldoende monsters beoordeelt om zich ervan te verzekeren dat de gekozen testmethode voldoet aan de criteria van de gebruiker. Het is ook de verantwoordelijkheid van de gebruiker om te bepalen of testmethoden en resultaten aan de vereisten van klanten en leveranciers voldoen. Zoals bij elke testmethode, garanderen de verkregen resultaten van het gebruik van een 3M Food Safety-product de kwaliteit van de geteste matrices of processen niet. Garantiebeperkingen/Beperkte Oplossing BEHALVE WAAR UITDRUKKELIJK VERMELD IN EEN BEPERKTE GARANTIEBEPALING VAN EEN INDIVIDUELE PRODUCTVERPAKKING, WIJST 3M ALLE UITDRUKKELIJKE EN IMPLICIETE GARANTIES AF, MET INBEGRIP VAN, MAAR NIET BEPERKT TOT, ELKE GARANTIE MET BETREKKING TOT DE GOEDE WERKING EN DE GESCHIKTHEID VOOR EEN BEPAALD DOEL. Als een 3M Voedselveiligheidproduct gebrekkig is, zal 3M of zijn gevolmachtigde distributeur naar eigen keuze het product vervangen of de aankoopprijs van het product terugbetalen. Dit is het enige 3  NL (Nederlands) rechtsmiddel waarover u beschikt. Indien u vermoedt dat een product gebrekkig is, dan moet u 3M daarvan binnen de 60 dagen na het vaststellen op de hoogte brengen. Bel onze klantenservice (+31-71-5450386) of uw erkende vertegenwoordiger voor 3M Voedselveiligheid, die u autorisatie voor het retourneren van de goederen zal geven. Beperking van 3M-aansprakelijkheid 3M IS NIET AANSPRAKELIJK VOOR ENIG VERLIES OF SCHADE, ONGEACHT OF HET GAAT OM RECHTSTREEKSE, ONRECHTSTREEKSE, SPECIALE, INCIDENTELE OF GEVOLGSCHADE, MET INBEGRIP VAN, MAAR NIET BEPERKT TOT WINSTDERVING. In geen geval zal de wettelijke aansprakelijkheid van 3M onder om het even welke juridische theorie de aankoopprijs van het zogenaamd gebrekkige product overschrijden. Opslag en afvalverwerking Bewaar de inhoud van de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test bij 2-8 °C. Niet invriezen. Bewaar verdunde werkzame oplossingen zoals beschreven in Tabel 1. De onderdelen van de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test mogen niet worden gebruikt na de vervaldatum. De vervaldatum en het partijnummer zijn terug te vinden op het etiket aan de buitenzijde van de doos. Afvoeren volgens de huidige plaatselijke/regionale/nationale/industriële standaarden en regelgevingen. Gebruiksaanwijzingen Volg alle instructies zorgvuldig op. Het niet opvolgen van de instructies kan onnauwkeurige resultaten tot gevolg hebben. De reagentia voorbereiden Laat alle reagentia voorafgaand aan gebruik op omgevingstemperatuur komen (20-25 °C). Gebruik schone laboratoriumproducten om werkzame oplossingen te verdunnen en te bewaren. a. 3M Extractiebuffer Om de 1X extractiebuffer te bereiden, voegt u één deel van de 3M Extractiebuffer (4X) toe aan drie delen gedeïoniseerd of gedestilleerd water om te verdunnen. Verwarm voorafgaand aan gebruik de extractiebuffer (1X) voor tot 50-60 °C in een waterbad of schudincubator. Elk monster vereist 4,5 ml van de 1X extractiebuffer. b. 3M Verdunningsoplossing Om de 1X verdunningsoplossing te bereiden, voegt u één deel van het 3M Verdunningsmiddel (5X) toe aan vier delen gedeïoniseerd of gedestilleerd water. Elk monster vereist in totaal 4,5 ml van het 1X verdunningsmiddel. c. 3M Wasoplossing Om de 1X wasoplossing te bereiden, voegt u één deel van het 3M Wasoplossing (20X) toe aan 19 delen gedeïoniseerd of gedestilleerd water. Elke 3M ELISA well vereist ongeveer 2,5 ml 1X wasoplossing. Opmerking: Wanneer de 3M Wasoplossing (20X) wordt opgeslagen bij 2-8 °C is het mogelijk dat zich kristallen vormen in de oplossing. Om kristallen op te lossen verwarmt u de 3M Wasoplossing (20X) tot 30-35 °C in een waterbad of incubator voorafgaand aan de bereiding van de wasoplossing (1X). d. 3M Hazelnoot HRP-conjugaat Om het 1X Hazelnoot HRP-conjugaat te bereiden, voegt u één deel van het 3M Hazelnoot HRP-conjugaat (10X) toe aan 9 delen van de 1X verdunningsoplossing. Bereid deze oplossing onmiddellijk voor gebruik. Elke 3M ELISA well vereist 100 μl van het 1X Hazelnoot HRP-conjugaat. Voorbereiding monster Opmerking: Alle monsters moeten worden geëxtraheerd met 1X extractiebuffer voorverwarmd tot 50-60 °C. 1.1 Bereid het monster voor proteïne-extractie in een schoon testbuisje of wegwerpbuisje zoals beschreven in Tabel 2. Tabel 2. Voorbereiding monster Monstermatrix Monstergrootte Verdunning (1/10) Vaste voedingsmiddelen 0,5 ± 0,02 g Voeg 4,5 ± 0,09 ml voorverwarmde 1X extractiebuffer toe Vloeibare voedingsmiddelen 0,5 ± 0,01 ml Voeg 4,5 ± 0,09 ml voorverwarmde 1X extractiebuffer toe CIP-water ('clean-in-place') van de laatste spoeling 0,5 ± 0,01 ml Voeg 4,5 ± 0,09 ml voorverwarmde 1X extractiebuffer toe 4  NL (Nederlands) Vaste stof Vloeistof 1.2 Incubeer de monsters 25 ± 1 minuut lang in een schudwaterbad of schudincubator bij 50-60 °C. Een andere optie is de monsters in een waterbad of incubator van 50-60 °C plaatsen en elke 5 minuten 1 minuut lang handmatig schudden. 1.3 Centrifugeer de monsters 20 tot 30 seconden bij 5000-7000 rpm (3000 x g) na incubatie om deeltjes te pelletiseren of laat de monsters 5 minuten in een testbuisrek bezinken. 1.4 Verzamel 100 μl vanuit de middelste (waterige) laag en voeg dit toe aan 900 μl verdunningsoplossing (1X). Meng de oplossing goed door middel van schudden of mengen in de vortexmenger. (Dit correspondeert met een 1/100 verdunning van het originele monster.) 50-60 °C 00:25:00 of 00:05:00 of 3000 g / 00:00:30 5  NL (Nederlands) ELISA-procedure 2.1 Verwijder één 3M ELISA well per monster en/of standaard en plaats de wells in de daarvoor geschikte houder. Plaats de ongebruikte 3M ELISA wells terug in de foliezak, hersluit de zak en plaats deze terug in opslag bij 2-8 °C. 2.2 Bereid met behulp van het 3M Hazelnoot Proteïne Standaardconcentraat een set van vijf standaarden verdund in verdunningsoplossing (1X). Nummer standaard Concentratie standaard (ng/ml) Volume van standaard toegevoegd aan 1X verdunningsmiddel Volume van 1X verdunningsoplossing 5 810 10 μl 3M Hazelnoot Proteïne Standaardconcentraat 990 μl 4 270 200 μl van standaard nummer 5 400 μl 3 90 200 μl van standaard nummer 4 400 μl 2 30 200 μl van standaard nummer 3 400 μl 1 10 200 μl van standaard nummer 2 400 μl 0 0 0 400 μl 2.3 Pipetteer 100 μl van elke standaard in 3M ELISA wells. • • • • • • Standaard 0 (1X Verdunningsoplossing) Standaard 1 (10 ng/ml) ppb Standaard 2 (30 ng/ml) ppb Standaard 3 (90 ng/ml) ppb Standaard 4 (270 ng/ml) ppb Standaard 5 (810 ng/ml) ppb 2.4 Pipetteer 100 μl van het monster dat is geëxtraheerd in stap 1.4 in een 3M ELISA well. 2.5 Incubeer 3M ELISA wells 30 ± 2 minuten in een orbitale schudmachine ingesteld op 400 rpm op omgevingstemperatuur (20-25 °C). Voorkom verdamping door de wells afgedekt en horizontaal te houden tijdens deze stap. 2.6 Aspireer de inhoud van de 3M ELISA wells na de incubatie. 2.7 Vul elke 3M ELISA well volledig met 1X wasoplossing en aspireer deze daarna. Indien het wassen handmatig wordt uitgevoerd, draai de plaat om en giet/schud de inhoud leeg in een afvalcontainer. Sla de wells krachtig op absorberend papier om resterende wasoplossing te verwijderen. Herhaal deze stap drie keer om in totaal vier wasbeurten te voltooien. 2.8 Pipetteer 100 μl 1X Hazelnoot HRP-conjugaat in elke 3M ELISA well. Incubeer 10 ± 2 minuten in een orbitale schudmachine ingesteld op 400 rpm op omgevingstemperatuur. Houd de plaat tijdens deze stap afgedekt in het donker en horizontaal. 2.9 Herhaal stappen 2.6 en 2.7 om in totaal vier wasbeurten te voltooien met wasoplossing (1X). 2.10 Pipetteer 100 μl 3M Chromogene substraatoplossing (TMB) in elke 3M ELISA well. 2.11 Incubeer 10 minuten in een orbitale schudmachine ingesteld op 400 rpm op omgevingstemperatuur. Houd de plaat tijdens deze stap afgedekt in het donker en horizontaal. 2.12 Voeg na de incubatie 100 μl 3M Stopoplossing toe aan elke 3M ELISA well en bepaal de absorptie (bij 450 nm) binnen 30 minuten. 6  NL (Nederlands) 00:30:00/omgevingstemperatuur 00:10:00/omgevingstemperatuur 00:10:00/omgevingstemperatuur Resultatenanalyse 3.1 Trek de gemiddelde achtergrondwaarde van elk monster af (de gemiddelde gemeten absorptie van het monster minus de gemiddelde gemeten absorptie van standaard nul). 3.2 Construeer een standaardcurve, met behulp van computersoftware die in staat is een logische curve met vier parameters te genereren, door de concentratie in ng/ml (ppb) op de x-as en de gemeten absorptie van elke bijbehorende standaard op de y-as uit te zetten. Een polynoom (kwadratisch) van de tweede orde of andere curves kunnen ook worden gebruikt; ze zullen echter een minder nauwkeurig beeld kunnen vormen van de gegevens. 7  NL (Nederlands) 3.3 Bereken de monsterconcentraties van de standaardcurve; de eenheid van het resultaat is ng/ml (ppb). Vermenigvuldig daarna de monsterverdunningsfactor om de concentratie van het originele monster te verkrijgen. Bijvoorbeeld, als de totale verdunning van het monster 1/100 is en de monsterconcentratie van de standaardcurve is 200 ng/ml (ppb), dan is de uiteindelijke monsterconcentratie 200 ng/ml x 100 = 20.000 ng/ml (ppb), wat gelijk is aan 20 μg/ml (ppm). Minimale prestatiekenmerken a. De analytische detectiegrens is 1,9 ng/ml (ppb) De detectiegrens wordt gedefinieerd als de laagste concentratie van het allergeen in een testmonster dat kan worden onderscheiden van een blanco monster op een specifiek waarschijnlijkheidsniveau3. Het wordt bepaald door drie standaarddeviaties op te tellen bij de gemiddelde optische dichtheidswaarde van zesendertig herhalingen van standaard nul en de bijbehorende concentratie te berekenen. b. De kwantificatielimiet is 1 ppm De kwantificatielimiet wordt gedefinieerd als het laagste niveau van het allergeen in een testmonster dat redelijkerwijs gekwantificeerd kan worden op een gespecificeerd precisieniveau3. Precisie Precisie intratest Gemiddeld %CV = <10 N=12 Precisie intertest Gemiddeld %CV = <10 N=12 Specificiteit en kruislingse reactiviteit Deze test herkent hazelnootproteïne en is getest met diverse monsters op kruislingse reactiviteit (Tabel 3.) Tabel 3. Kruislingse reactiviteit van de 3M Hazelnoot Proteïne ELISA test. Matrixmonster % kruislingse reactiviteit Amandelmeel <1% Amandelmelk <1% BLG <1% Paranoot <1% Boekweitmeel <1% Rundercaseïne <1% Rundermelk <1% Cashew <1% Selderij <1% Kikkererwt <1% Kokosmeel <1% Kokosmelk <1% Maismeel <1% Parvalbumine uit vis <1% Hazelnoot (+) Limaboon <1% Macadamianoot <1% Mosterdzaad <1% Ovomucoïde <1% Erwtenextract <1% Pindameel <1% Pecannoot <1% Pijnboompit <1% 8